Virus de la peste equina africana expresión y aplicaciones de sus proteinas estructurales

Résumé

EL OBJETIVO DE ESTA TESIS DOCTORAL FUE EL DESARROLLO DE VACUNAS DE SEGUNDA GENERACION FRENTE AL VIRUS DE LA PESTE EQUINA AFRICANA. COMO PRIMERA ESTRATEGIA, SE PLANTEO LA SINTESIS DE CAPSIDAS VIRALES VACIAS UTILIZANDO LA CAPACIDAD DE AUTOENSAMBLAJE DE LAS PROTEINAS ESTRUCTURALES VP2, VP3, VP5 Y VP7 DEL VIRUS CUANDO SE EXPRESAN SIMULTANEAMENTE EN EL SISTEMA DE EXPRESION DE BACULOVIRUS. PARA ELLO, SE CLONARON, SECUENCIARON Y EXPRESARON EN CELULAS DE INSECTO LOS GENES QUE CODIFICAN PARA LA VP2 Y VP3. SIN EMBARGO, LA IMPOSIBILIDAD DE EXPRESAR CORRECTAMENTE LA VP3 HIZO INVIABLE ESTA ESTRATEGIA INICIAL, POR LO QUE NOS CENTRAMOS EN LA CARACTERIZACION ANTIGENICA DE LA VP2 Y VP5 Y EN LA IDENTIFICACION DE EPITOPOS NEUTRALIZANTES EN LA VP2. ADEMAS ESTUDIAMOS LA INMUNIDAD CONFERIDA POR DIVERSAS COMBINACIONES DE LAS PROTEINAS VP2, VP5 Y VP7 EN CABALLOS. MEDIANTE FRAGMENTACION DEL GEN DE LA VP2, SE IDENTIFICO LA ZONA MAS INMUNOGENICA DE LA PROTEINA, SITUADA ENTRE LOS AMINOACIDOS 200 Y 413 Y ADEMAS SE OBSERVO QUE TODOS LOS FRAGMENTOS QUE CONTIENEN LA REGION ENTRE LOS AA 285 Y 413, Y EXPRESADOS EN E. COLI, FUERON CAPACES DE INDUCIR ANTICUERPOS NEUTRALIZNATES EN RATONES Y CONEJOS. POR OTRA PARTE, LA COMBINACION DE LAS PROTEINAS VP2, VI5 Y VP7 EXPRESADAS EN CELULAS DE INSECTO PROTEGIERON A LOS CABALLOS FRENTE A UN DESAFIO CON VIRUS INFECTIVO.