Secuenciación y análisis funcional de 26 kb del DNA de "Saccharomyces cerevisiae" y caracterización del gen responsable del fenotipo del mutante DGT1-1

Resumen

Como contribución al proyecto de secuenciación del genoma de S. cerevisiae hemos determinado y analizado la secuencia nucleotídica de dos fragmentos de 15.5 y 10.6 Kb respectivamente. Dichos fragmentos estan localizados en el brazo izquierdo del cromosoma XV. El análisis de la secuencia reveló la presencia de 16 fases de lectura abierta que codificarian proteínas mayores de 100 aminoacidos, cuatro de ellas completamente internas. Se encontraron los genes SMF1, RP55A, RP28A, HRP1 y HXT11, el pseudogen YOL153c compuesto de una fase de lectura abierta interrumpida por dos codones de terminación en fase y las fases de lectura abierta YOL155c, YOL154w, YOL119c y YOL118c. El análisis fenotipico de estas cuatro últimas se ha realizado dentro del proyecto europeo de análisis funcional (EUROFAN). Se interrumpieron dichas fases de lectura abierta en las cepas diploides FY1679 y CENPK2 de S. cerevisiae. Se analizaron los haploides interrumpidos y los diploides homocigotos generados. En ninguna de las condiciones ensayadas se encontraron diferencias con respecto a las células silvestres. En el presente trabajo tambien se ha demostrado que DGT1-1 y BPC1-1 son alelos mutantes del gen silvestre MTH1 y se ha puesto de manifiesto mediante el sistema del doble híbrido la interaccion de Mth1p y Dgt1p con Snf3p. El defecto que presenta el mutante DGT1-1 en la expresión de los genes que codifican los transportadores de glucosa, puede deberse al bloqueo de la señal generada por el sensor de alta afinidad de glucosa Snf3p.