Establecimiento de la secuencia aminoácida del encima aminopeptidasa p por secuenciación de edman y técnicas de espectrometría de masas

Resumen

EN ESTA MEMORIA SE DESCRIBE LA CONTINUACION DE LA CARACTERIZACION DE LA AMINOPEPTIDASA P QUE HA CONSISTIDO FUNDAMENTALMENTE EN LA DETERMINACION DE SU SECUENCIA AMINOACIDA. PARA ELLO SE HA EMPLEADO LA TECNICA DE LA DEGRADACION DE EDMAN, LAS MODALIDADES DE ESPECTROMETRIA DE MASAS, MALDI, DESORCION INDUCIDA POR RADIACION LASER, Y FAB/LSIMS, BOMBARDEO CON ATOMOS RAPIDOS/DESORCION DE IONES SECUNDARIOS. PARA LLEVAR A CABO ESTE ESTUDIO HAN SIDO NECESARIAS CUATRO HIDROLISIS PRIMARIAS DE AP-P CON TRIPSINA (T), ENDOPROTEASA ASP-N (D), BROMURO DE CIANOGENO (B) Y ENDOPROTEASA LYS-C (E). EL RESULTADO DE LA DETERMINACION APARECE REPRESENTADO EN EL ESQUEMA GENERAL 1, PAG. 3. LA SECUENCIA AMINOACIDA CONSTA DE 623 AMINOACIDOS. LAS CINCO CISTEINAS APARECEN SUBRAYADAS Y LAS SEIS POSICIONES DE N-GLICOSILACION MARCADAS CON UN ASTERISCO. IGUALMENTE SE HA DETERMINADO LA MASA MOLECULAR DE UNA DE LAS FRACCIONES DE AP-P EN ESTADO NATIVO, ASI COMO LA MASA MOLECULAR DE LAS SUBUNIDADES GLICOPROTEICAS DESPUES DE SU DESGLICOSILACION MEDIANTE TRATAMIENTO CON PNHASA F (N-GLICOSIDASA F). EL RESULTADO ES QUE ESTA GLICOPROTEINA ESTA FORMADA POR TRES SUBUNIDADES GLICOPROTEICAS IGUALES Y QUE SU GRADO DE N-GLICOSILACION ES DE UN 20%.