Análisis de intermediarios de replicación y estudio de la interferencia entre orígenes

Resumen

Hemos estudiado la replicación del vector lanzadera yrp7' en e. Coli, s. Cerevisiae y extractos de oocitos de xenopus mediante electroforesis bidimensional en geles de agarosa. Los resultados obtenidos nos han permitido demostrar que: 1) yrp7'Replica de forma diferente en los tres sistemas estudiados, 2) la forma del patrón de hibridación de las burbujas es diferente dependiendo de que la replicación proceda de forma unidireccional o bidireccional especifica ya que los intermediarios de replicación que los generan no comigran totalmente en un gel bidimensional, 3) el patrón de hibridación de burbujas procedente de una replicación al azar está constituido por la sumatoria de las señales de burbuja generadas por distintas poblaciones de intermediarios de replicación que no comigran en toda su extensión. También hemos estudiado la interferencia entre orígenes de replicación del plásmido ppi21, que deriva de pbr322 y de psm19035 y posee dos repeticiones invertidas que contienen un origen de replicación de tipo co1e1 cada una. Los datos obtenidos demuestran que la orientación de los orígenes de replicación no afecta a la interferencia entre orígenes y que un origen de replicación de tipo co1e1 actúa como barrera polar a la progresión de otras horquillas de replicación. Además, se ha identificado una nueva especie de moléculas constituida por isr que contienen una burbuja interna con distintos grados de anudamientos en la región replicada. Hemos desarrollado un modelo computacional que nos permite, conocidos varios parámetros de una secuencia problema, simular su replicación y predecir los resultados experimentales obtenidos de su análisis mediante electroforesis bidimensional. El programa informático desarrollado nos permite obtener la población de intermediarios de replicación esperada así como predecir los patrones correspondientes.