Estudio del mecanismo de inserción en membrana de la Penicillin Binding Protein 3 de "Escherichia coli"

Resumen

EL TRABAJO SE HA CENTRADO EN LA CARACTERIZACION DE LOS MECANISMOS Y DE LAS PROTEINAS IMPLICADOS EN LA CORRECTA DISPOSICION EN LA MEMBRANA PLASMATICA DE LA PBP3 DE ESCHERICHIA COLI. PARA ELLO HEMOS ANALIZADO LA TOPOLOGIA DE LA PBP3 SALVAJE Y CON MUTACIONES EN ZONAS RELEVANTES PARA LA EXPORTACION, TANTO EN ESTIRPES SALVAJES COMO EN MUTANTES DEFECTIVOS EN GENES DE SECRECION. ASIMISMO HEMOS CONSTRUIDO UNA SERIE DE FUSIONES GENICAS ENTRE DISTINTOS FRAGMENTOS DE LA PBP3 Y REGIONES DE PROTEINAS CITOPLASMATICAS ( -GALACTOSIDASA), DE MEMBRANA EXTERNA (OMPA) Y EXCRETADAS (SPA), ANALIZANDO SU EXPORTACION Y FUNCIONALIDAD. ESTOS ESTUDIOS HAN PERMITIDO CONCLUIR LO SIGUIENTE: 1) LA PBP3 SE ENCUENTRA DIRIGIDA MAYORITARIAMENTE HACIA EL PERIPLASMA Y CON UN PEQUEÑO FRAGMENTO EN EL CITOPLASMA. 2) EL ANCLAJE A LA MEMBRANA PARECE REALIZARSE POR EL EXTREMO AMINO (QUE SE COMPORTA COMO UN PEPTIDO SEÑAL NO PROCESADO) Y POR EL EXTREMO CARBOXILO, MEDIANTE UN FRAGMENTO EXTENSO (30 KD) QUE PUDIERA INTERACCIONAR CON LA MEMBRANA Y/O CON EL PEPTIDOGLICANO. 3) EN LA REGION CARBOXILO HAY UNA ZONA DE MODIFICACION Y/O PROCESAMIENTO, IMPORTANTE PARA LA FUNCIONALIDAD DE LA PROTEINA. 4) LA INSERCION EN MEMBRANA DE LA PBP3 ES DEPENDIENTE DE LOS PRODUCTOS ACTIVOS DE LOS GENES SECA Y SECY, SIENDO POSIBLEMENTE LA REGION AMINO DE LA PBP3 LA QUE INTERACCIONA CON LA MAQUINARIA DE EXPORTACION. 5) LA PROTEINA FTSZ INTERVIENE EN LA LOCALIZACION CORRECTA DE LA PBP3 EN ZONAS SEPTALES.