Clonaje y caracterización de los genes que codifican por los RNAs ribosomales de "Penicillium chrysogenum" y su utilización en vectores de transformación

Resumen

Se ha realizado el clonaje y caracterizacion de los genes que codifican el rna ribosomico de p. Chrysogenum. Se ha determinado que parte de dichos genes estan agrupados en una unidad que se repite en serie en el genoma aproximadamente 50 veces. Se ha realizado el mapa fisico mediante enzimas de restriccion y el mapa de transcripcion de los mismos. La transformacion de p. Chrysogenum se produce por integracion del vector en el cromosoma del huesped. Puesto que en este trabajo se ha establecido que los genes que codifican por el rna ribosomico en p. Chrysogenum estan repetidos, suponen una buena diana para dirigir la integracion de secuencias transformantes sin afectar genes vitales de secuencia unica. Se ha estudiado como influye la presencia en el vector de la unidad de repeticion ribosomal completa o de fragmentos de la misma en la frecuencia de transformacion de p. Chrysogenum y en la localizacion cromosomica de los transformantes obtenidos. Los resultados indican que la presencia de la repeticion ribosomal en el vector no incrementa la frecuencia de transformacion, es decir, que esta no depende del porcentaje de homologia entre el vector y el cromosoma del huesped, y ademas no se detecta la presencia de secuencias de replicacion autonoma en dicha repeticion ribosomal. Los estudios sobre la localizacion cromosomica del vector en los transformantes indican que la presencia en el vector de fragmentos de la repeticion ribosomal que codifican por uno o varios genes ribosomales permite la integracion en dicho locus rdna, no habiendose encontrado integrantes en dicho locus si los fragmentos corresponden a zona no cidificante.