Aislamiento y caracterización molecular del receptor del fibrinógeno (la integrina GPIIb/IIIa) de plaqueta humana

Resumen

El complejo gpiib/iiia es el receptor de fibrinogeno en plaquetas activadas, implicado en el proceso de agregacion plaquetaria. El hecho de que pertenezca a la familia de de receptores de adhesion, denominada integrinas, hace que su estudio sea de interes no solo en el campo de la hemostasia sino tambien en otras areas de la biologia. En la presente tesis se ha desarrollado un nuevo metodo de aislamiento de gpiib y gpiiia en disoluciones de sds y de aislamiento del complejo gpiib/iiia y gpiib y gpiiia en disoluciones de un detergente no ionico tx100, y empleando cromatografias de intercambio ionico y exclusion molecular. Ademas se ha realizado la caracterizacion molecular del complejo gpiib/iiia, gpiib y gpiiia en disoluciones de tx100, en terminos de tamaño, forma y estado de asociacion de los complejos glicoproteina-detergente, utilizando cromatografia de exclusion molecular, ultracentrifugacion analitica, dispersion de luz laser y microscopia electronica. Tambien se ha realizado el estudio de las propiedades de union de calcio a gpiib, gpiiia y al complejo gpiib/iiia en disoluciones de tx100 y de este ultimo reconstituido en liposomas, empleando la tecnica de dialisis y espectrometria de absorcion atomica. Por ultimo se ha determinado la concentracion de calcio que regula el estado de asociacion de gpiib y gpiiia para formar el complejo gpiib/iiia, en disolucion, utilizando cromatografia de exclusion molecular y ultracentrifugacion analitica.