Clonación y secuenciación del gen de la muramidasa del bacteriófago CP-1 de "Streptococcus pneumoniae"

Resumen

En este trabajo se ha demostrado experimentalmente que el genoma del bacteriofago cp-1 (fago especifico de streptococcus pneumoniae) codifica una enzima litica, cpl, que es capaz de reconocer y degradar paredes de neumococo que contienen colina, in vivo e in vitro. Se ha conseguido clonar y expresar en grandes cantidades el gen que codifica para cpl, en el sistema heterologo e.Coli. Esto ha permitido purificar la enzima en gran escala mediante un sistema de cromatografia de afinidad en sepharosa-colina 6b. Se han determinado las caracteristicas cineticas de la enzima pura, y se ha caracterizado bioquimicamente como una muramidasa. Se ha secuenciado el gen cpl que codifica para esta muramidasa, observandose la existencia de una gran homologia en las regiones c-terminales de la enzima litica del huesped (s. Pneumoniae) y la codificada por el fago. Sin embargo no se han encontrado homologias significativas en la region amino terminal de ambas lisinas. La propiedad mas significativa que ambas enzimas tienen en comun es la absoluta necesidad de colina como componente del peptidoglicano de la pared celular de neumococo, este hecho junto con el estudio comparativo de estas secuencias con la de la muramidasa de chalaropsis, sugiere que la parte c-terminal de la amidasa de neumococo asi como la de la muramidasa del fago cp-1, podrian estar implicados en el reconocimiento de la colina. Asimismo, en la region amino terminal de ambas enzimas estarian localizados los centros activos. Los resultados presentados ponen de manifiesto un caso de relacion evolutiva entre la lisina fagica y una lisina de la celula huesped.