Interacción de la tubilina con análogos bifenilicos de la colchicina diseño de inhibidores de microtúbulos

Résumé

Se ha caracterizado la interaccion de la tubulina con analogos de la colchicina en los cuales se ha transformado el anillo de eter metilico de tropolona en un anillo de p-carboximetil-benceno (allo y tcb) y posteriormente se transformo el sustituyente de este anillo (tkb, tmb y tba) y por ultimo se cambiaron de posicion los sustituyentes del anillo de trimetoxi-benceno (tmb'). Se ha observado que la union de los ligandos allo, tcb, tkb y tmb es especifica en el sitio de la colchina en la tubulina. Estos analogos se unen reversiblemente a la tubulina. La union de la allo es lenta y la de los demas ligandos es rapida. Las isotermas de union muestran que estos ligandos se unen a un sitio en la tubulina. La union de los ligandos allo, tcb y tkb esta acompañada de extincion de la fluorescencia intrinseca de la proteina y perturbacion del espectro de dicroismo circular de la tubulina. Estos cuatro ligandos inhiben el ensamblaje de los microtubulos in vitro, allo y tkb de forma subestequiometrica y tcb y tmb de forma estequiometrica. Allo, tcb y tkb inducen la polimerizacion anormal de la tubulina. El analisis de los resultados en terminos del modelo bifuncional de union de la colchicina muestra que la transformacion del anillo de eter metilico de tropolona en un anillo de p-carboximetil-benceno disminuye la afinidad en 1,4 kcal-mol y que la eliminacion del anillo b la disminuye en 1,0 kcal-mol, no siendo necesaria su presencia para que una molecula se una a la tubulina. Ademas es importante la posicion espacial de los oxigenos del sustituyente en el anillo de p-carboximetil-benceno, asi como la de los sustituyentes del anillo de trimetoxi-benceno.