Relación entre los dominios estructurales y funcionales de la Ca2+-ATPasa de retículo sarcoplásmico de músculo esquelético

Resumen

TANTO LA TRIPSINA COMO LA QUIMOTRIPSINA PRODUCEN UN PRIMER CORTE EN LA CA-ATPASA QUE LA DIVIDE EN DOS FRAGMENTOS DE UN TAMAÑO SIMILAR. LA TERMOLISINA, AUNQUE PRODUCE LA RUPTURA DE MULTIPLES ENLACES PEPTIDICOS, CENTRA SU ACTIVIDAD CERCA DEL CENTRO DE UNION DEL FITC (PROXIMO AL PRIMER LUGAR DE CORTE DE LA TRIPSINA). LA FACILIDAD CON QUE LAS PROTEASAS INTERACCIONAN CON ESTA REGION DE LA CA-ATPASA, INDICA QUE PERTENECE A UNA REGION PERIFERICA DEL ENZIMA EN CONTACTO CON EL DISOLVENTE. EL MARCAJE DE LA CA-ATPASA CON (14C) DCCD, A BAJA RELACION DCCD/SR, PRODUCE UNA INHIBICION SELECTIVA DE LA REACCION DE HIDROLISIS DEL FOSFOENZIMA, SIN INCORPORACION SIGNIFICATIVA DE LA MARCA. ESTE EFECTO SE ATRIBUYE AL BLOQUEO DE GRUPOS CATALITICAMENTE ACTIVOS, POR LA REACCION DEL COMPLEJO O-ACILISOUREA INICIAL CON NUCLEOFILOS INTERNOS (ENTRECRUZAMIENTO) O EXTERNOS. EL MARCAJE DE LA CA2+-ATPASA (14C) DCCD, A ALTA RELACION DCCD/SR, PRODUCE LA INHIBICION DE LA UNION DEL CA2+, EL MARCAJE DE LOS FRAGMENTOS TRIPTICOS A1 Y A2 Y UN ENTRECRUZAMIENTO GENERALIZADO. EL ENTRECRUZAMIENTO INTERCATENARIO, Y EN ALGUNA MEDIDA, EL INTRACATENARIO SON PREVENIDOS POR LA PRESENCIA DE NUCLEOFILOS EXTERNOS DURANTE LA INCUBACION CON EL DCCD. LA PRESENCIA DE CA2+ DURANTE EL MARCAJE PREVIENE LA INACTIVACION FUNCIONAL DEL ENZIMA, EL MARCAJE DEL FRAGMENTO A2 Y EL ENTRECRUZAMIENTO INTERNO DEL FRAGMENTO A1, PRODUCIDOS CUANDO EL CA2+ NO ESTA PRESENTE EN EL MEDIO. SE PROPONE QUE TANTO EL FRAGMENTO A1 COMO EL A2 PARTICIPAN EN LA FORMACION DEL DOMINIO DE UNION DEL CA2+ QUE LOS GRUPOS DEL FRAGMENTO A2 MARCADOS CON DCCD ESTAN DIRECTAMENTE IMPLICADOS EN LA UNION DEL CA2+. EL MARCAJE DE LA CA2+-ATPASA CON IAEDANS NO PRODUCE PERDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA, ENCONTRANDO LA MARCA ASOCIADA AL FRAGMENTO TRIPTICO B (COMO EL FITC). LAS MEDIDAS DE TRANSFERENCIA DE ENERGIA DESDE EL IAEDANS AL FITC O EL TNP-AMP (CENTRO DE UNION DEL NUCLEOTIDO) SON CONSISTENTES CON UNA DISTANCIA DE 56 Y 68 A R