Aportaciones al estudio del metabolismo extracelular de la adenosinalocalizacion del enzima adenosina desaminasa y caracterizacion de los sistemas de transporte nucleosidico en celulas sanguineas

Resumen

LA ADENOSINA SE HA ESTABLECIDO COMO UN IMPORTANTE REGULADOR DE ALGUNOS PROCESOS FISIOLOGICOS EN VARIOS TEJIDOS. SU MECANISMO DE ACCION IMPLICA LA INTERACCION CON RECEPTORES DE ADENOSINA SITUADOS EN LA SUPERFICIE CELULAR. SE DESCONOCE LA FUENTE DE ADENOSINA IMPLICADA EN LA INTERACCION CON SUS RECEPTORES ESPECIFICOS ASI COMO LOS MECANISMOS QUE REGULAN SU PRODUCCION Y ELIMINACION. EN ESTA MEMORIA SE DETALLA EL ESTUDIO DE LOS FACTORES POTENCIALES QUE CONTROLAN DIRECTAMENTE LOS NIVELES EXTRACELULARES DE ADENOSINA EN CELULAS SANGUINEAS. EL ESTUDIO HA TENIDO DOS OBJETIVOS RELACIONADOS: A) EVALUAR LA NATURALEZA ECTOENZIMATICA DEL ENZIMA ADENOSINA DESAMINADA (ADA) EN ALGUNAS CELULAS SANGUINEAS. B) CARACTERIZAR LOS SISTEMAS DE TRANSPORTE NUCLEOSIDICO EN ERITROCITOS HUMANOS Y ESPLENOCITOS DE RATON. EN PRIMER LUGAR, SE HA REALIZADO LA PURIFICACION DE LA ADA DE ERITROCITOS HUMANOS MEDIANTE CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD UTILIZANDO RIBONUCLIOSIDO DE PURINA (NEBULARINA) COMO LIGANDO. SE HA OBTENIDO EL ENZIMA HOMOGENEO, LO CUAL HA PERMITIDO SINTETIZAR ANTICUERPOS ESPECIFGICOS ANTI-ADA POR INMUNIZACION INTRADERMICA MULTIPLE DE CONEJOS CON LA ADA PURIFICADA. LA ADA SE HA LOCALIZADO EN LA MEMBRANA CITOPLASMATICA DE ERITROCITOS, PLAQUETAS Y CELULAS MONONUCLEARES MEDIANTE TECNICAS INMUNOCITOQUIMICAS DE MICROSCOPIA OPTICA Y ELECTRONICA CON CELULAS INTACTAS EN SUSPENSION. MEDIANTE TECNICAS EXCLUSIVAMENTE BIOQUIMICAS, SE HA DESMOSTRADO TAMBIEN LA ASOCIACION DE LA ADA EN LAS MEMBRANAS DE LOS ERITROCITOS. PARA LA CARACTERIZACION DE TRANSPORTE NUCLEOSIDICO POR DIFUSION FACILITADA EN ERITROCITOS HUMANOS, SE MIDIERON LAS TRAYECTORIAS DE EQUILIBRACION DE VARIOS NUCLEOSIDOS POR TECNICAS CINETICAS RAPIDAS BAJO CONDICIONES DE ""ZERO-TRANS"" Y EQUILIBRIUM-EXCHANGE"". EL TRANSPORTE DE TODOS LOS NUCLEOSIDOS SE ADAPTO AL MODELO DE TRANSPORTADOR SIMPLE CON SIMETRIA DIRECCIONAL. SE CARACTERIZO EN ESPLENOCITOS DE RATON UN TRANSPORTE NUCLEOSIDICO NA+-DEPENDIENTE,