Estructura secundaria en disolución de fragmentos peptídicos de ribonucleasa A

Resumen

El objeto de esta tesis ha sido determinar la estructura secundaria en disolucion de fragmentos pepticidos de la enzima ribonucleasa a con el fin de obtener datos experimentales que permitan contrastar los modelos que han sidopropuestos para explicar el proceso por medio del cual la cadena polipeptidica. De una proteina se pliega hasta adquirir su estructura nativa. Para lograr este objetivo ha sido preciso en primer lugar obtener los fragmentospeptidicos que no se encuentran disponibles comercialmente. Esta obtencion se harealizado por medio de hidrolisis enzimaticas de la ribonucleasa y el aislamiento de los peptidos en cantidad suficiente para ser estudiados por rmn empleando cromatografia liquida de alta eficacia de fase inversa a nivel preparativo. Una vez aislados los fragmentos peptidicos las conclusiones acercade su estructura se han basado en los datos obtenidos bajo un gran numero de condiciones experimentales por las tecnicas espectroscopicas de dicroismo circular y resonancia magnetica nuclear. Se ha comprobado que los fragmentos con estructura de helice alfa en la ribonucleasa en estado nativo mantiene la misma estructura cuando se encuentran aislados en disolucion acuosa. Asi la estructura secundaria puede existir en ausencia de interacciones estabilizantes de tipo terciario existentes en la proteina un apoyo experimental solido a la teoria del plegamiento en etapas pudiendo actuar las helices alfha como centros de nucleacion en el proceso de plegamiento global de la proteina.