Clonaje molecular y expresión específica de un gen de la tóxina Tionina de cebada

Resumen

Se ha aislado un clon genómico correspondiente al gen de Alfa-Hordotionina, utilizándose una sonda de C-DNA. Este clon, denominado TH1, tiene aproximadamente 15 kb de longitud. La zona codificante esta contenida en un fragmento eco-sal de 3.4 kb, el cual se ha subclonado en el vector puc19, denominándose a este Plásmido recombinante PTHG1. Se han secuenciado aproximadamente 2 kb de PTHG1. El gen de Alfa-Hordotionina contiene 2 intrones. El péptido señal deducido de la secuencia de PTHG1 resulta ser 6 AA más largo que el deducido del C-DNA. Este nuevo péptido señal posee un AA. Cargado en la región contigua al cordón de iniciación, mientras que el deducido del clon C-DNA no posee aa. Cargados. Esto sugiere que el c-dna era de longitud incompleta. La region 5 flanqueante posee varias señales reguladoras tipicas de los genes eucaríotas: Tata Box y Catc Box. Además aparecen zonas que presentan homología se secuencia con otros genes de plantas. El sitio de iniciación de la transcripción corresponde a las posiciones -46 y -47. La primera es la posición más probable. El número de copias correspondientes a este gen se ha estimado en 2-5. Se ha estudiado la especificidad de expresión mediante las técnicas de Dot Blot e hibridación con MA marcado. La conclusión es que este gen se expresa específicamente en endospermo. Asimismo, se ha estudiado la expresión de este gen durante el desarrollo del grano. El máximo nivel de expresión tiene lugar entre 13 y 19 días después de la polinización.