Estudio de los subcentros fijadores de fosfato de la ribonucleasa a por modificacion quimica

Resumen

La ribonucleasa a (rnasa a) reacciona con 6-cloropurina ribosa 5'monofosfato (cl6rmp) para dar lugar a un solo derivado mayoritario, o-ii, monosustiuido en la lys-1. Los estudios realizados con el o-ii permitieron postular un modelo de interaccion entre la rnasa a y el rna. La presencia de nucleotidos naturales en la mezcla de reaccion produce una inhibicion de la tasa de reaccion del cl6rmp segun el siguiente orden: 3'amp mayor que 5'amp = 5'cmp mayor que 3'cmp, indicando el caracter de marcaje por afinidad de la reaccion. El estudio comparativo de la interaccion de ka rnasa a, o-ii y d-e (analogo del o-ii sin el fosfato del marcador) con los nucleotidos 3'amp y 5'amp demuestran que los porcentajes de inhibicion observados pueden ser interpretados segun el grado de ocupacion del subcentro fijador del fosfato p2, donde interacciona el fosfato del cl6rmp para reaccionar con la lys-1 (pares et al 1980). El piridoxalfosfato (plp) reacciona con la rnasa a produciendo 3 derivados modificados en las lisinas 1, 7 y 41 respectivamente. Los estudios de inhibicion y cineticos realizados con los derivados apoyan tanto el modelo de interaccion rnasa a-rna propuesto como la posible presencia de la lys-7 en p2. El estudio por hplc de la reaccion entre la rnasa a y cdh (1,2c-clohexanodiona) en presencia y ausencia de 3'amp y 5'amp tambien apoyan la posible presencia de la alg-10 en p2 junto con la lys-7.