Apoptosis y criopreservación de progenitores hematopoyéticos de sangre periférica

Abstract

La cantidad de células CD34+ infundidas constituye un parámetro de gran valor para asegurar el éxito del implante del producto de células progenitoras hematopoyéticas trasplantado. Su cuantificación por citometria de flujo es considerado hoy el método de elección aceptado para la determinación de PHSP. Este trabajo propone el desarrollo de una técnica citométrica nueva que incluye todas las permisas conocidas para la cuantificación de células CD34+ en muestras de leucoaféresis y que permite conocer además, su viabilidad mediante identificación y cuantificación de las células CD34+ apoptóticas y necróticas. Para comprobar la validez del método propuesto, las determinaciones se realizaron en comparación con dos métodos ya estandarizados, y en dos momentos diferentes: antes de la congelación y tras la descongelación de los progenitores hematopoyéticos. Además, se estudia el efecto de la criopreservación sobre las células mediante la incorporación del marcador de detección de apoptosis precoz Anexina V. Los resultados obtenidos indican que con nuestro método es mayor la población de progenitores que se obtiene tanto en la precongelación como tras la descongelación. Ello es debido a la aplicación del sistema de ventanas consecutivas, la utilización de fluoresfera que permite la cuantificación de la concentración celular, y a la utilización de fluorocromos que ofrecen marcaje más específico y mayor avidez por el antígeno CD34. En cuanto al estudio del efecto de la cripreservación se detecta disminución de la concentración de progenitores tras la descongelación. Estas variaciones sin embargo no parecen estar relacionadas con pérdidas selectiva de células sino con la disminución en la inmunorreactividad por alteración del antígeno CD34. Finalmente, el estudio de otros factores como la utilización de determinada quimioterapia en el tratamiento previo, el uso de quimioterapia en la movilización