Estudio de los mecanismos de activacion e inhibicion de la procarboxipeptidasa b mediante mutagenesis dirigida

Resumen

La procarboxipeptidasa b pancreática se ha expresado en la levadura P.pastoris. El proenzima recombinante se ha purificado y caracterizado resultando sus mecanismos de activación y inhibición idénticos a los de la proteina purificada de páncreas. Mediante el uso de mutagenesis dirigida se ha desvelado el papel de las diferentes dianas de activación tríptica presentes en el segmento de activación de la PCPB. Asimismo se ha demostrado el papel crucial que juega la región de conexión de dicho segmento en la proteólisis de la procarboxipeptidasa b. Por último, se ha observado que la falta de actividad residual en este zimogeno se debe, en parte, al hecho de que presenta bloqueado el centro de fijación de sustratos. La presencia de una estructura en forma de hélice que dificulta el acceso al centro activo ha de ser el otro elemento que contribuye a la inhibición.