Caracterización funcional de dominios estructurales del transportador neuronal de glicina GLYT2

Resumen

La glicina es el principal neurotransmisor inhibidor junto con el GABA, es el sistema nervioso central de mamiferos. Su acción finaliza mediante recaptura específica de la hendidura sinaptica a traves de los transportadores de alta afinidad. GLYT1 y GLYT2, localizados en la membrana plasmática de neuronas y células de glía. Para conocer el mecanismo de funcionamiento de la neurotransmisión mediada por glicina, es necesario un estudio detallado de su estructura y biología molecular. En este trabajo hemos estudiado el papel funcional de diferentes dominios estructurales de los transportadores de glicina mediante la utilización de técnicas bioquímicas, de biología molecular y electrofisiológicas. Para este fin nos hemos planteado los siguientes objetivos:1.- Analisis de las propiedades diferenciales de los transportadores GLYT1 y GLYT2 en lineas celulares que expresan de forma estable estas proteinas.2.-Caracterizacion del papel funcional de los siguientes dominios estructurales en la actividad del transportador GLYT2:a) Regiones amino y carboxilo terminal. B) Cadenas oligosacarídicas unidas a residuos de asparagina(N-glicosilación). C)Bucles hidrofílicos extracelulares que unen dominos transmembrana. Se han hallado diferencias funcionales y electrofisiológicas entre los dos transportadores de glicina especificos del SNC,GLYT1b y GLYT2a,mediante la comparación de sus actividades en un sistema heterólogo de expresión estable. GLYT2 presenta diferente perfil farmacológio que GLYT1, una menor afinidad aparente por el ión C1, un mayor acoplamiento al gradiante quimiosmótico de Na+y una mayor dependencia del voltaje de las corrientes producidas tanto en presencia como ausencia de sustrato. Los extremos amino y carboxilo terminales de GLYT2 se localizan al igual que en el caso de GLYT1 en el interior celular. Estos dominios no afectan directamente a la actividad funcional del transporador sino que participan en la inserció