Advances in the serological diagnosis of "Toxoplasma gondii" and "Neospora caninum" infections in the field of animal health

Laburpena

Introducción: la toxoplasmosis y la neosporosis son dos enfermedades causadas por los parásitos apicomplejos Toxoplasma gondii y Neospora caninum, respectivamente, que están distribuidos globalmente. La toxoplasmosis es una zoonosis y una de las principales causas de fallo reproductivo en pequeños rumiantes, con el consiguiente elevado impacto económico. Neospora caninum no es un patógeno zoonótico, pero es una de las principales causas de aborto en bovinos y también se asocia a fallos reproductivos en rumiantes. En la actualidad, el diagnóstico de estas parasitosis se basa con frecuencia en métodos serológicos, que podrían mejorar mediante la aplicación de una técnica más sensible como la fluorometría en tiempo retardado (TRFIA). Material y métodos: esta tesis se compone de tres actividades: (1) una revisión sistemática y meta-análisis sobre el desarrollo de nuevos métodos serológicos para diagnosticar toxoplasmosis en humanos y animales, enfocada a la perspectiva One Health y a analizar críticamente el proceso de validación; (2) un estudio de la seroprevalencia y factores de riesgo asociados a la infección por T. gondii en perros y gatos de un área antropizada (Bangkok, Tailandia); y (3) el desarrollo y validación de nuevas TRFIAs para detectar anticuerpos anti-T. gondii en suero de gatos y cabras, y anti-N. caninum en suero y leche de ovejas. En gatos, se evaluaron varios antígenos recombinantes y quiméricos mediante esta técnica. La validación analítica se basó en la estimación de la precisión intra- e inter-ensayo, sensibilidad (Se) analítica, exactitud y la reactividad cruzada con patógenos filogenéticamente relacionados. La validación diagnóstica se realizó mediante la evaluación del potencial discriminatorio entre positivos y negativos de la técnica (test de Mann Whitney), un análisis ROC (para la determinación del punto de corte óptimo, sensibilidad, especificidad -Sp- y área bajo la curva), la concordancia (usando el valor kappa) y el coeficiente de correlación de Spearman. Resultados: hay una falta de aplicación del enfoque One Health en los estudios sobre diagnóstico serológico de toxoplasmosis, especialmente en aquellos realizados en humanos y por investigadores médicos. El proceso de validación de nuevos métodos es muy heterogéneo y con frecuencia solo se realiza una validación diagnóstica y no analítica. La seroprevalencia de T. gondii en gatos y perros de Bangkok fue de 18,7% y 7,9%, respectivamente. Se desarrolló una TRFIA para detectar anticuerpos anti-T. gondii en gatos, en la que el antígeno quimérico TgSAG1-GRA8 obtuvo un mejor rendimiento diagnóstico en comparación con otros antígenos. Además, se desarrolló una TRFIA basada en el mismo antígeno quimérico para detectar anticuerpos anti-T. gondii en cabras con excelentes resultados en la Se analítica, y Se y Sp en el análisis ROC. Sin embargo, la reactividad cruzada con anticuerpos anti-N. caninum limita el uso de esta técnica. Finalmente, se desarrolló y validó una TRFIA basada en el antígeno recombinante NcGRA7 para detectar anticuerpos anti-N. caninum en suero sanguíneo y leche entera de ovejas, con alto rendimiento analítico y diagnóstico. Discusión y conclusiones: esta tesis doctoral aporta información nueva y actualizada sobre el desarrollo de métodos serológicos para diagnosticar infección por T. gondii en animales y humanos, destacando la necesidad de aplicación del enfoque One Health y del seguimiento del proceso de validación recomendado por la OIE. La elevada seroprevalencia de T. gondii en gatos y perros de Bangkok debería ser considerada como un riesgo para la salud pública en esta área antropizada. La nueva TRFIA desarrollada en esta tesis mejora la Se de las técnicas actuales de detección de infecciones por T. gondii y N. caninum y ha sido adaptada a muestras no invasivas, aunque se deberían evaluar mediante TRFIA nuevos antígenos de T. gondii para evitar la reactividad cruzada con N. caninum.