Nuevos avances en el estudio de la interacción de PPRV con el sistema inmune y evaluación de un candidato vacunal DIVA

Resumen

El virus de la peste de los pequeños rumiantes (PPRV) es un morbillivirus, familia Paramyxoviridae. Es el agente causal de la peste de los pequeños rumiantes (PPR), una enfermedad de grave impacto económico que afecta en especial a los países en vías de desarrollo. Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígeno profesionales, responsables del desarrollo de una correcta respuesta inmune frente a los patógenos y, a la vez, diana del virus. Nuestro objetivo fue evaluar si la infección con PPRV podía alterar la funcionalidad de las DC. Las DC se encuentran principalmente en dos estados funcionales, inmaduro y maduro, por lo que se estudió el efecto de la infección por PPRV en ambas etapas. Las DC inmaduras ovinas (iMoDC) se diferenciaron con GM-CSF e IL-4 a partir de células CD14+ (monocitos) de sangre periférica, y se maduraron (mMoDC) con Poly I:C. La infección con PPRV modificó la expresión de marcadores como MHC-I, MHC-II, CD80, CD86, CD14, CD209, CD11b y CD11c, en iMoDC y mMoDC. La funcionalidad de las MoDC también se vio alterada por PPRV: la capacidad fagocítica de las iMoDC infectadas estaba reducida, mientras que las mMoDC infectadas eran incapaces de estimular la proliferación de linfocitos T. El análisis transcriptómico (RNAseq) de las mMoDC infectadas mostró 518 genes sobreexpresados y 170 reprimidos. Los análisis KEGG y GSEA indicaron que PPRV modulaba rutas de señalización relacionadas con la regulación de la autofagia, el reconocimiento del virus (TLR, NF-kappa B o receptores tipo NOD) o la señalización de citoquinas (IFN, interleukinas, TNF o TGF-beta), y funciones biológicas tales como la presentación antigénica, quimiotaxis, autofagia o la apoptosis. Los resultados indican que PPRV afecta a la actividad de las DC a lo largo de su proceso de diferenciación, comprometiendo así la respuesta inmune adaptativa. La infección de PPRV en las DC podría contribuir al efecto inmunosupresor de la infección visto en los hospedadores naturales. El mecanismo de citotoxicidad celular mediada por anticuerpo (ADCC) es una herramienta que la respuesta inmune adaptativa emplea para eliminar las infecciones virales. Para evaluar la capacidad de sueros ovinos inmunes a PPRV de mediar este mecanismo, se llevaron a cabo ensayos de citotoxicidad autólogos, empleando células NK ovinas como células efectoras, y células B infectadas con el virus como células diana. Los sueros inmunes de PPRV mostraron capacidad para unirse a la superficie de las células B ovinas infectadas y desencadenar una respuesta ADCC. Además, estos sueros eran capaces de reconocer las proteínas de fusión (F-PPRV) y hemaglutinina (H-PPRV) de PPRV expresadas en células 293 T transfectadas con sus plásmidos de expresión. Los sueros inmunes a PPRV también reconocían y mediaban la lisis por ADCC de las células transfectadas, lo que significaría que durante la infección las proteínas H y F de PPRV son dianas naturales de dicho mecanismo. Estos resultados señalarían que el mecanismo de ADCC podría contribuir a la eliminación de la enfermedad en el hospedador natural infectado con PPRV. Por último, se evaluó un nuevo candidato vacunal basado en un vector herpesvirus que incluía el gen que codifica la proteína H de PPRV (BoHV-4-A-PPRV-H-¿TK). Las ovejas inmunizadas con este vector estaban protegidas frente al desafío con una cepa virulenta de PPRV y, en sus secreciones, no se detectó el virus. Se pudo establecer una correlación entre la protección y la generación de IgGs anti-PPRV, anticuerpos neutralizantes y células productoras de IFN-¿. Así, este candidato vacunal tiene el potencial de superar el efecto inmunosupresor de PPRV. La detección de anticuerpos exclusivamente dirigidos a la proteína H en los animales vacunados antes del desafío con PPRV permitiría distinguir entre animales infectados y vacunados (vacuna DIVA) al usar BoHV-4-A-PPRV-H-¿TK. Por todo ello, BoHV-4-A-PPRV-H-¿TK es un candidato vacunal con gran potencial en su uso frente a PPRV.