Implicación de los genes virales I215L, A238L y EP402R del Virus de la Peste Porcina Africana en la modulación de la respuesta inmune innata

Resum

El virus de la peste porcina africana (VPPA) es uno de los virus ADN más complejos que existen, debido a su gran genoma, que codifica entre 150 y 170 genes, los cuales están implicados en múltiples funciones, como la evasión de la respuesta inmune del hospedador. El VPPA es el agente causal de la peste porcina africana (PPA), una de las enfermedades más letales que afectan al cerdo doméstico y al jabalí, la cual está poniendo en grave peligro a la industria porcina mundial debido a su rápida expansión. Las vacunas inactivadas y de subunidades han fracasado en el intento de conferir protección a los animales vacunados, ya que parece que la replicación del virus es necesaria para poder conferir dicha protección. La generación de vacunas vivas atenuadas (LAVs) constituyen la estrategia más prometedora, a través de la atenuación de cepas del VPPA mediante su manipulación génica. Para la generación de LAVs efectivas y seguras, es necesario identificar cuáles son los factores determinantes de la virulencia del VPPA. Las diferencias en virulencia entre las distintas cepas del VPPA se han relacionado en parte con diferencias en la modulación de la respuesta inmune innata, concretamente, en el control del IFN-I, por lo que el estudio de los mecanismos moleculares y la identificación de los factores virales implicados en el control de la respuesta inmune innata por parte del VPPA es crítico para el desarrollo de LAVs eficientes y seguras. En la presente tesis doctoral hemos descrito que el VPPA, tanto la cepa naturalmente atenuada NH/P68 como la cepa virulenta Arm/07/CBM/c2, inhibe la ruta JAK/STAT inducida por IFN-I mediante dos mecanismos diferentes: la degradación proteasomal de STAT2 y la proteólisis de STAT1 dependiente de caspasa-3. La existencia de dos mecanismos independientes de control de la vía JAK/STAT sugiere la importancia de prevenir esta vía para el éxito de la replicación viral. En línea con estos resultados, nuestro trabajo ha identificado a la enzima ubiquitina-conjugasa del VPPA, pI215L, como factor inhibidor de la vía de señalización de IFN-I, mediante la interacción, ubiquitinación y degradación proteasomal de STAT2. Además, nuestros datos han confirmado que la degradación de STAT2 mediada por pI215L depende de su actividad catalítica, revelando por primera vez la implicación de la actividad ubiquitina-conjugasa de pI215L en la modulación de la respuesta inmune. Por último, el tercer artículo incluido en esta tesis doctoral ha caracterizado el prototipo vacunal derivado de la cepa Arm/07/CBM/c2 de la cual se han eliminado los genes EP402R (CD2v) y A238L mediante la tecnología CRISPR/Cas9. Nuestros resultados confirman, por un lado, la falta de control de la producción de IFN-l del prototipo vacunal in vitro, así como su atenuación in vivo, demostrando que esta vacuna es segura y protectora contra la cepa virulenta coreana circulante ASFV/Korea/Pig/Paju1/2019 de genotipo II