Identificación y caracterización de mecanismos inmunosupresores de células epiteliales oralespapel de la prostaglandina E2

Resumen

En la mucosa oral se encuentra una extensa variedad de células del sistema inmunitario que proporcionan una primera línea de defensa contra los organismos patógenos, pero también deben tolerar los antígenos de los alimentos y las bacterias comensales. Las células epiteliales podrían jugar un papel importante en la inducción de esta tolerancia, ya que pueden influir tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa. Las células epiteliales de diferentes mucosas proporcionan un entorno específico en el tejido que condiciona la respuesta inmunitaria de las células circundantes. Además, las células epiteliales de las mucosas secretan mediadores inmunomoduladores solubles y actúan como células presentadoras de antígenos. Las células epiteliales orales (OECs) también modulan las respuestas inmunitarias de células dendríticas y células T CD4, como quedó patente en estudios previos de nuestro grupo de investigación. Usando sistemas de co-cultivos de las líneas de OECs H413 y TR146 y de OECs primarias con DCs y/o células T CD4 demostramos que, en presencia de las OECs, las DC estimulados con bacterias no maduraron completamente y perdieron su capacidad de activar a células T CD4 naive alorreactivas. Del mismo modo, las OECs suprimieron la activación y respuesta de las células T CD4 estimuladas con anticuerpos anti-CD3/CD28. En esta tesis, hemos evaluado en mayor detalle la inmunosupresión ejercida por éstas mismas OECs y hemos investigado los posibles mecanismos responsables de este fenómeno. Nuestros datos indican que las OECs suprimen la expresión intracelular de T-bet e IFNg en células T CD4 y CD8 activadas tanto por DCs como por anticuerpos anti-CD3/CD28. Esta inmunosupresión de células T no estuvo acompañada de una expansión de células Treg. Este comportamiento inhibitorio se incrementaba conforme aumentábamos la ratio de cultivo celular OEC:T CD4. Además, los ensayos tipo time-lapse mostraron que las OECs inhiben los primeros pasos de la activación de las células T, de acuerdo con la incapacidad de las OECs para suprimir la respuesta de las células T CD4 estimuladas con PMA/ionomicina. Para identificar la vía molecular subyacente a la supresión de células T causada por las OECs, evaluamos el papel de las interacciones de contacto directo entre las OECs y las células T e investigamos posibles mediadores inhibitorios solubles. El bloqueo de las interacciones directas CD40/CD40L, CD58/CD2 y PD-L1/PD-1 no revocó la supresión de células T mediada por las OECs. Sin embargo, observamos que tanto la prevención de la síntesis de la molécula soluble prostaglandina E2 (PGE2) en las OECs como el bloqueo de su unión a los receptores específicos EP2/EP4 en la célula T restauraron completamente la producción de IFNg y TNFa en células T CD4 condicionadas por OECs. Esto sugiere que el principal mecanismo de inmunosupresión de células T por las OECs depende de su capacidad para secretar PGE2. Las DCs, por el contrario, son inhibidas probablemente a través de otros mecanismos independientes de PGE2 ya que la expresión de CD80, CD86 y HLA-DR fue reducida en presencia de las células TR146 incluso después de su tratamiento con indometacina. Finalmente, evaluamos si las OECs podían modular su comportamiento inmunosupresor en condiciones de amenaza, simulando una infección viral estimulando a las OECs con poly(I:C). Dicho tratamiento aumentó la expresión de las citoquinas proinflamatorias IL-6, IL-8, CXCL10 e IFNb en las células TR146 y limitó la supresión sobre células T CD4. En conclusión, razonamos que la secreción de PGE2 por parte de las OECs constituye un mecanismo inherente para suprimir las respuestas inmunes y que probablemente ha evolucionado para evitar reacciones exacerbadas del sistema inmunológico contra bacterias residentes. En cambio, este estado tolerogénico puede ser eludido cuando las OECs están bajo amenaza directa.