Pluripotencialidad de las células de la granulosa luteinizadas de ovario humanoestrategias regenerativas en medicina reproductiva

Resumen

Las Células de la Granulosa Luteinizadas del Ovario Humano (CGLOH) han sido identificadas como fuentes potenciales de células pluripotentes de estirpe mesenquimal, que pueden ser obtenidas a partir de las primeras por medio de procesos de expansión y diferenciación in vitro. En virtud de esta posible derivación, la población obtenida, que denominaremos Células Granulosas Progenitoras Expandidas (CGPE), podrían ejercer efectos protectores frente a la activación de mecanismos de estrés celular endógeno o exógeno, y sobre los procesos de regulación endógena de la apoptosis celular en modelos experimentales orientados a reproducir la perdida de reserva ovárica fisiológicamente asociada al envejecimiento y la depleción folicular causada por una alta toxicidad germinal. Nuestro estudio selecciona para ello dos modelos de toxicidad experimental, el Estrés Oxidativo (OS) y el Estrés Carbonílico (OC), como vías moleculares finales de inducción de la apoptosis por pérdida de protección asociada al envejecimiento. El objetivo principal de nuestro estudio fue evaluar la capacidad de expresión de marcadores de pluripotencialidad en las Células de la Granulosa Luteinizadas (CGLOH) obtenidas por medio de punción folicular para Fecundación In Vitro (FIV), y la capacidad de protección frente al daño celular inducido experimentalmente ejercida por las Células de la Granulosa Progenitoras (CGP). Mediante citometría de flujo, pudimos comprobar como CGLOH tras cultivo prolongado, presentan características propias de Células Mesenquimales de Médula Ósea (MSCMO) y de grasa establecidos por la International Society for Cellular Therapy (ISCT). Además, se consiguió la diferenciación selectiva a líneas mesenquimales específicas, adipogénica, condrogénica y osteogénica mediante medios condicionados adecuados. La pluripotencialidad de las CGLOH ha sido evaluada también aplicando metodologías de análisis de expresión génica diferencial. Se sometió a las CGLOH a una citotoxicidad experimental inducida por peroxidación y por estrés carbonílico, exponiéndolas a Peroxinitrito y a Glioxal respectivamente. La evaluación de la capacidad protectora de las Células de la Granulosa Progenitoras Expandidas (CGPE), medida mediante apoptosis y muerte celular, se realizó determinando la apoptosis y muerte celular por medio de la cuantificación expresión de Anexina V y Ioudoro de Propidio respectivamente, empleando citometría de flujo. Las CGPE presentan características funcionales diferenciadoras respecto de las CGLOH, que incluyen menor expresión de marcadores funcionales propios de Células de la Granulosa (CG) y mayor de actividades relacionadas con la promoción de la proliferación celular, de la angiogénesis y de la protección frente a la apoptosis. La evaluación de la capacidad protectora de las CGPE frente a citotoxicidad experimental, medida mediante viabilidad, apoptosis y muerte celular, nos permitió observar su efecto reductor de la toxicidad celular experimental, que está en relación con la síntesis de factores protectores frente a la toxicidad celular ejercida sobre las CGLOH, y ejercen dicho efecto por medio de la síntesis de factores protectores frente a la apoptosis, inductores de la angiogénesis y promotores de la proliferación celular. El aislamiento, tras cultivo in vitro prolongado, de una subpoblación de la CGLOH da lugar a una población de CGPE que adquieren morfología similar a las de las células mesenquimales. Estas células, expresan marcadores propios de célula mesenquimal pluripotente y ausencia de marcadores de pluripotencialidad embrionaria, siendo susceptibles de diferenciación selectiva a líneas mesenquimales específicas. Además, presentan menor expresión de marcadores funcionales propios de CGLOH y mayor de actividades relacionadas con la promoción de la proliferación celular, de la angiogénesis y de la protección frente a la apoptosis.