PROCEDIMIENTO PARA LA CUANTIFICACION DE NEOSPORA CANINUM EN MUESTRAS DE SEMEN BOVINO.

Resumen

Procedimiento para la cuantificación de Neospora caninum en muestras de semen bovino.

La presencia de N. caninum en muestras de semen bovino se cuantifica mediante una PCR cuantitativa en tiempo real, la cuál utiliza el sistema SYBR Green I. Para la extracción de ADN del parásito de semen, se separa el fluido seminal de la fracción celular y se extrae el ADN de cada una de las fracciones utilizando una prueba comercial. Si es semen congelado con diluyente, la muestra se pasa a través de una columna de cromatografía de Sephacryl S-400 y el ADN se precipita con isopropanol y glicógeno. La cuantificación de N. caninum se realiza mediante interpolación del Ct (ciclo umbral: ciclo en el que una muestra se considera positiva) sobre una curva estándar construida con concentraciones conocidas de ADN del parásito frente a sus respectivos Ct. Para la cuantificación del ADN del hospedador se realiza con otra curva estándar con concentraciones conocidas de ADN genómico.