Producción de ocratoxina a en las principales especies de "Aspergillus" sección circumdatiestudio de los genes implicados, métodos de detección y control

Resumen

La ocratoxina A (OTA) es una micotoxina con propiedades tóxicas frente a animales y humanos que se ha encontrado frecuentemente en una gran variedad de sustratos comunes en la dieta. Incluidas dentro de Aspergillus sección Circumdati se encuentran im portantes especies ocratoxígenas como A. ochraceus, A. steynii y A. westerdijkiae, algunas de las cuales han sido poco estudiadas hasta el momento debido a su reciente descripción. Esta tesis se ha centrado en el estudio de la producción de OTA en es tas especies así como en el desarrollo de nuevos métodos de detección y control. Las técnicas moleculares para la detección de hongos toxígenos son sensibles y específicas, y suponen una reducción importante en el tiempo de análisis. En este trabajo, se han desarrollado ensayos de PCR para la discriminación de A. ochraceus, A. westerdijkiae y A. steynii y se ha demostrado que se pueden aplicar para la detección de estas especies directamente en sustratos naturales. Por otro lado, se ha puesto a punto un ensayo de PCR a tiempo real para la detección y cuantificación de A. ochraceus y A. westerdijkiae en uvas y café verde. La capacidad de producir OTA de estas especies también ha sido estudiada y se ha comprobado que A. ochraceus no es la pri ncipal productora de la sección Circumdati como se pensaba hasta el momento, sino que A. westerdijkiae y, principalmente, A. steynii producen OTA a niveles más elevados y su porcentaje de cepas productoras es mucho mayor. Además, se ha establecido el efecto de la temperatura, la actividad de agua y la composición del sustrato sobre el crecimiento y la producción de OTA en estas dos últimas especies y se ha comprobado que A. westerdijkiae es capaz de crecer más que A. steynii en todos los casos, mientras que A. steynii puede producir niveles muy altos de toxina en un mayor rango de condiciones. La ruta de síntesis de OTA en el género Aspergillus está muy poco estudiada hasta el momento. En esta tesis, se ha demostrado mediante RT-PCR a tiemp o real la implicación de tres genes en la ruta biosintética de OTA en A. westerdijkiae (pks, p450-B03 y nrps) y se ha caracterizado un gen, p450ste, cuyos niveles de expresión se relacionan con la concentración de OTA extracelular. Por último, se ha estudiado la posible utilización de Debaryomyces hansenii CYC 1244 como agente de biocontrol frente a A. westerdijkiae ya que se ha demostrado que su presencia supone una disminución en el crecimiento y la producción de OTA por parte del hongo. El ag