Purificación y caracterización de diferentes formas mutantes de la citotoxina alfa-sarcina

  1. LACADENA GARCIA GALLO FRANCISCO JAVIER
Dirigida por:
  1. Álvaro Martínez del Pozo Director

Universidad de defensa: Universidad Complutense de Madrid

Año de defensa: 1997

Tribunal:
  1. Jose Gregorio Gavilanes Franco Presidente
  2. Covadonga Vázquez Estévez Secretaria
  3. Jose Luis Barbero Esteban Vocal
  4. Mercedes Oñaderra Sanchez Vocal
  5. Jose Luis Garcia Lopez Vocal
Departamento:
  1. Bioquímica y Biología Molecular

Tipo: Tesis

Teseo: 59416 DIALNET

Resumen

La alfa-sarcina es una proteína producida por el hongo aspergillus giganteus mdh 18894, perteneciente a un grupo de ribotoxinas fungicas que se caracterizan por su carácter citotoxico, debido a su actividad ribonucleolitica. El cdna de esta proteína se ha clonado en diferentes sistemas de expresión permitiendo la purificación de alfa-sarcina recombinante, estructural y enzimáticamente indistinguible de la fúngica. Este sistema de expresión ha permitido la producción de grandes cantidades de formas marcadas uniforme y selectivamente (tyr y phe) con n15 y c13, aspecto este imprescindible para la resolución de la estructura tridimensional de la proteína. Se han purificado y caracterizado diferentes formas mutantes de la alfa-sarcina, en residuos pertenecientes al centro activo de la proteína. Esto ha podido confirmar la participación de las his50 y 137 en el mantenimiento de la actividad ribonucleolitica de esta proteína inactivante de ribosomas. Por otro lado, mutaciones en la cys76 y 132 implican una mayor dificultad en su purificación y su caracterización sugiere el mantenimiento de su capacidad para interaccionar con bicapas lipídicas.