Modulación del transcriptoma inmune de trucha por la proteína no viriónica (NV) del virus de la hemorragia septicémica viral (VHSV)nuevos hallazgos que correlacionan la secuencia de nv con su función

Resumen

El género Novirhabdovirus pertenece a la familia Rhabdoviridae y está formado por cuatro especies de virus que infectan exclusivamente peces y se caracterizan por poseer un gen adicional que codifica para una proteína no viriónica, NV, que da nombre al género. El virus de la septicemia hemorrágica viral, VHSV, tiene gran importancia para la acuicultura mundial debido al amplio y creciente rango de hospedadores que infecta, siendo la trucha arcoíris uno de los principales hospedadores del continente europeo. Además, su presencia es considerada de declaración obligatoria para la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). El gen NV no tiene similitud con ningún otro conocido hasta el momento y las proteínas NV presentan una alta homología intraespecie pero muy reducida interespecie. A pesar de ello, las proteínas NV de VHSV e IHNV comparten una función similar, siendo prescindibles pero necesarias para una eficiente replicación viral in vitro y esenciales para la patogenicidad in vivo de los novirhabdovirus. El efecto de ambas proteínas NV se ha relacionado con una menor respuesta antiviral, aunque se desconocen los genes y mecanismos de respuesta inmune exactos modulados por la NV, así como la implicación de la estructura en dicha función. Por ello, esta tesis planteó como principales objetivos caracterizar el transcriptoma inmune de trucha inducido por la NV recombinante de VHSV y delimitar las regiones y aminoácidos de la proteína NV implicados en la función. La proteína NV de VHSV se inoculó vía intraperitoneal en truchas y, posteriormente, se analizaron los RNAs de bazo y riñón cefálico de cada trucha y se determinó el perfil transcriptómico mediante un microarray. Los resultados mostraron una gran mayoría de genes, tanto de respuesta inmune innata como adaptativa, regulados negativamente; sugiriendo que la proteína NV inhibe la respuesta inmune humoral y celular del hospedador, interfiriendo con la respuesta antiviral temprana del mismo. Por otro lado, para delimitar las regiones de la proteína implicadas en su función, se generaron 8 fragmentos de la NV de VHSV y se midieron los transcritos de mx e il8 en células ZF4 transfectadas con dichos fragmentos. El fragmento N terminal más completo de la NV, F1, inhibió la expresión de mx e il8 de manera similar a la NV completa, mientras que el fragmento C terminal F2 perdió la función original de la proteína completa. Otros fragmentos N terminales más pequeños conservaron también la función, aunque incluyeran parte de la secuencia C terminal, sugiriendo que la parte N terminal es más importante que la C terminal para la función. También se generaron 11 variantes de la NV en las posiciones 28, 31, y de la 33 a la 41. Mientras algunas variantes conservaron o perdieron ligeramente la función, las variantes NVD36A, NVR39A y NVD41A incrementaron significativamente su capacidad de inhibición de mx e il8 en células ZF4. Además, todas las proteínas NV completas nativas o variantes, y los fragmentos N terminal de la NV, presentaron la misma localización citosólica perinuclear. Sin embargo, el fragmento C terminal no funcional F2 estaba difusamente distribuido en la célula, lo que sugiere que la localización está relacionada con la función y la función, a su vez, con la parte N terminal de la proteína NV. Recientemente se ha caracterizado un ligando de la NV, PPM1Bb, que defosforila TBK1 e interfiere con la respuesta de RIG I. Las variantes NVD36A, NVR39A y NVD41A podrían ser más efectivas en la estabilización de PPM1Bb y la defosforilación de TBK1. Así, el perfil transcriptómico de trucha inducido por la NV permite conocer mejor el modelo de infección por VHSV y los procesos de señalización implicados en la respuesta inmune frente a rhabdovirus.