Obtención de sondas de adn para la detección de penicillium polonicum productor de verrucosidina en industrias cárnicas

Resumen

Durante la elaboración de productos cárnicos curados de larga maduración, como el jamón curado, se desarrolla una población microbiana compuesta fundamentalmente por mohos entre los que pueden encontrarse especies toxigénicas. Para el control de estos mohos toxigénicos, es necesario disponer de métodos rápidos y sensibles de detección, entre los que se encuentran la hibridación con sondas de ADN. Para la elaboración de este tipo de sondas se pueden utilizar diferentes estrategias en función de si es conocida o no la secuencia de los genes que pueden estar relacionados con la síntesis de la micotoxina. En el caso de las micotoxinas, dado que para la mayoría de ellas se desconoce la ruta metabólica de su síntesis, una posible estrategia a abordar es la elaboración de una biblioteca de ADN genómico, seleccionando los clones obtenidos mediante la hibridación con sondas elaboradas en condiciones de producción y de no producción de la micotoxina, y la elaboración y la posterior selección y comprobación de la sonda seleccionada con P. Polonicum productor de verrucosidina. En el presente trabajo se optimó esta metodología para cada una de las etapas y se consiguió elaborar una biblioteca de ADN con 5000 clones, seleccionando 120 clones como posibles portadores de ADN relacionado con la síntesis de verrucosidina. A partir de estos clones se obtubieron sondas que fueron posteriormente seleccionadas con ARNm obtenido en diferentes condiciones de producción de verrucosidina. Una de las sondas probadas (denominada SVr1)mostró una alta sensibilidad y especificidad en la detección de P. Polonicum productor de verrucosidina. La metodología ensayada permite la detección sensible y específica de P. Polonicum en aproximadamante 24 h y debería ser considerada para la elaboración de sondas en mohos productores de otras micotoxinas.