Modulación de la actividad de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa citosólica (pepck-c) porcina por efectores alostéricos, por mutagénesis y por las regiones reguladoras de la expresión

Resumen

La fosfoenolpiruvato carboxiquinasa citosólica (PEPCK-C) porcina es una enzima relevante en la determinación de los caracteres de calidad de la carne y de la canal, como el espesor de la grasa dorsal, la grasa intramuscular o la exudación. En un trabajo previo de nuestro grupo demostramos la importancia de la mutación p.M139L de la PEPCK-C porcina y el probable papel in vivo de los dos sentidos de la reacción. En esta tesis se exploran nuevas formas de regulación de la actividad de la PEPCK-C. La primera forma de regulación estudiada fue el uso de efectores enzimáticos. Mediante el uso del inhibidor ácido 3-mercaptopicolínico se ha determinado que la sustitución M139L produce modificaciones en el sitio de unión de GTP/GDP al enzima causantes de las diferencias en la actividad enzimática. A su vez se han descrito dos nuevos inhibidores no competitivos de la PEPCK-C, los cuales podrían modificarse químicamente para hacerlos más solubles y ser utilizados in vivo para modular la actividad de la PEPCK-C. La segunda forma de regulación estudiada fue la creación de mutantes artificiales de la PEPCK-C con una de sus dos actividades inhibida y la otra sin modificar. Estos mutantes son estables en cultivo celular, por lo que podrían utilizarse para estudiar in vivo como ambos sentidos de la reacción catalizada por la PEPCK-C modifican las variaciones en la infiltración grasa del cerdo. La tercera forma de regulación estudiada fue la búsqueda de nuevos SNPs en las regiones reguladoras del gen de la PEPCK-C. Se han descrito 62 SNPs, de los cuales uno situado en la región 3’UTR era interesante por aparecer en cerdos Duroc y por estar en el sitio de unión de un microARN que regula el metabolismo de la glucosa. Al analizar el SNP se observó que aparece en poblaciones Duroc x Landrace/Large White actuales pero no está asociado a ningún carácter fenotípico de infiltración grasa.