Desarrollo, evaluación y aplicación de marcadores moleculares para la caracterización genética de cepas vínicas de saccharomyces cerevisiae

Résumé

En el presente trabajo se ha desarrollado la selección y caracterización de un panel de seis loci microsatélites polimórficos, con un elevado poder de discriminación, así como sus condiciones de amplificación múltiple, gracias a lo cual se dispone de unos nuevos marcadores moleculares efectivos para la identificación, tipificación y diferenciación genética de cepas de S. cerevisiae. Paralelamente, se ha evaluado la aplicación de diversos tipos de marcadores moleculares basados en la PCR (RAPDs, CAPS, AFLPs y SSRs), para la aplicación y caracterización genética de cepas de S. cerevisiae, poniéndose de manifiesto que las técnicas empleadas poseen un poder de discriminación y resolución suficiente para diferenciar de forma clara cepas de esta especie, superando las limitaciones existentes con los métodos de taxonomía clásica, aunque el grado de polimorfismo, el poder resolutivo, la efectividad y la rapidez de la técnica varían de unos métodos a otros. Tras una evaluación comparativa de los marcadores moleculares citados, el panel de los loci microsatélites seleccionados se revela como la técnica más eficiente, presentando un elevado grado de polimorfismo y poder de discriminación, y generando un mayor número de alelos efectivos por unidad de ensayo. Este sistema, cuenta además con la ventaja de la sencillez y agilidad del método e interpretación de los resultados, presentando una excelente reproducibilidad. Posteriormente, se ha aplicado el análisis de microsatélites (SSRs) al estudio de la ecología fermentativa de poblaciones de S. cerevisiae autóctonas de la D.O. Vinos de Madrid. Se ha puesto de manifiesto la elevada biodiversidad genética de la microbiota de esta especie, responsable de la fermentación espontánea de los mostos de dicha D.O., sin llegar a identificarse cepas dominantes y marcadamente representativas.