Análisis genético de los dominios funcionales implicados en la formación del intermediario fosforilado de la H+-ATPasa de "Saccharomyces cerevisiae"

Resumen

Mediante mutagenesis dirigida se han identificado una serie de aminoácidos esenciales para la función de la h-atpasa. El residuo lys474, está localizado en el sitio de unión de atp, y la caracterización bioquímica de enzimas portadores de la mutación k474r sugiere que este residuo está implicado en la formación del intermediario fosforilado. La lys474 es el sitio de unión del análogo de la adenosina, fluoresceína isotiocianato. Para identificar regiones del enzima implicadas en la formación del intermediar fosforilado hemos realizado un análisis de supresión intragénica de la mutación k474r. Una de las mutaciones supresoras, v396i, es especifica de alelo y está localizada cerca del residuo que es fosforilado durante el ciclo catalítico. Tres mutaciones supresoras, v484i, v484i/e485k y e485k/e486k, podrían compensar la alteración estructural introducida por la mutación k474r. Por último, tres mutaciones supresoras, a165v, v169i/d170n y p536l, no son específicas de alelo y parece que afectan a la localización del enzima en la membrana.