The saprolegniales morpho-molecular puzzlean insight into markers identifying specific and subspecific levels in main parasites

Resumen

Los Saprolegniales (Oomycetes) comprenden alrededor de 200 especies, algunas de las cuales, tienen la capacidad de infectar a animales acuáticos. Tradicionalmente, las especies de los oomycetes han sido delimitadas y caracterizadas basándose exclusivamente en caracteres morfológicos. Sin embargo, en las especies parásitas de animales, estas estructuras no suelen formarse, y si se observan son tremendamente plásticas y ambiguas, haciendo difícil una identificación precisa a nivel de especie. Por lo tanto, la identificación no solo a nivel de especie sino de poblaciones representa un desafío para la taxonomía de este grupo de organismos. Con el objeto de mejorar la taxonomía de los Saprolegniales, en este trabajo se han empleado distintas metodologías para examinar la validez como fuente de evidencia taxonómica de distintos marcadores morfológicos y moleculares. Para ello hemos centrado nuestros trabajos en dos especies de Saprolegniales parásitas de animales como Saprolegnia parasitica y Aphanomyces astaci. De este modo, hemos identificado que los filamentos con ganchos de los quistes de S. parasitica pueden servir como marcador para identificar la especie, e incluso a las especies parásitas de Saprolegnia. Además, en el proceso de estudio hemos podido establecer la función que desempeñan estas estructuras en el proceso infectivo, y que es la de actuar como estructura de adhesión. Mediante el estudio combinado de microscopía confocal y electrónica, hemos podido observar que debido al dinamismo de estos filamentos, este carácter no resulta adecuado para el estudio de poblaciones, como alguno autores habían sugerido. El estudio filogenético de Saprolegnia con marcadores moleculares nucleares y mitocondriales, y con reconstrucción de caracteres, mostró la existencia de un clado que engloba a todas la especies parásitas de Saprolegnia. Este análisis corroboró que los filamentos largos tiene validez taxonómica a nivel de especie 28 para S. parasitica, y que la presencia de ganchos en los filamentos es indicativo de una posible especie parásita. Mediante la aplicación de un sistema de taxonomía molecular basado en la región nrDNA ITS recientemente desarrollado, pudimos identificar que Saprolegnia australis es una especie parásita de huevos de salmónidos. El uso de marcadores específicos basados en ITS nos permitió también identificar al el organismo causante de la peste del cangrejo, A. astaci, en brotes ocurridos en España mortandades y en una especie invasora norteamericana. Por otro lado, la aplicación de marcadores utilizando las técnicas de RAPD-PCR, AFLP-PCR y microsatelites permitió genotipar poblaciones de Aphanomyces. Los resultados muestran que los marcadores de AFLP y microsatelites pueden distinguir los genotipos de A. astaci previamente descritos utilizando RAPDs. Además, a juzgar por los resultados obtenidos en este trabajo, el desarrollo de los marcadores de microsatelites potencialmente podría permitir la identificación de los genotipos en muestras diagnósticas con presencia de DNA del hospedante. Finalmente, los resultados obtenidos en este trabajo proporcionan una primera aproximación hacia la aplicación de nuevos marcadores para una correcta clasificación de los Saprolegniales, y una mejora en el conocimiento de sus poblaciones y estructura genética.