Aplicación de técnicas de PCR en tiempo real a la trazabilidad y autenticidad de los piensos

Resumen

La trazabilidad y el correcto etiquetado de los piensos y sus ingredientes son factores esenciales para prevenir fraudes y garantizar la seguridad alimentaria. En esta Tesis Doctoral se han desarrollado técnicas de PCR en tiempo real con sondas TaqMan® para la detección de las siguientes especies y grupos de especies animales en piensos: vaca, oveja, cabra, grupo rumiante, cerdo, pollo, pavo, pato, oca, grupo aviar, caballo, conejo, liebre, grupo lepórido (conejo y liebre) y pescados. Para ello, se seleccionaron marcadores mitocondriales (región polimórfica D-loop y genes 12S y 16S ARNr y se diseñaron sistemas específicos (cebadores/sonda TaqMan® de PCR en tiempo real para la amplificación selectiva de fragmentos de ADN de pequeño tamaño entre 62 y 118 pb en todas las especies diana. Una vez comprobados los parámetros analíticos necesarios para la validación de las técnicas de PCR en tiempo real desarrolladas, se evaluó su aplicabilidad en el análisis de muestras reales de piensos destinados a animales de abasto. Los resultados obtenidos demostraron la capacidad de las técnicas para la detección específica de hasta un 0,1 % de las correspondientes especies diana en todas las muestras procesadas a 133 °C. Asimismo, el análisis cuantitativo de los datos indicó que el tipo de procesado térmico y el tejido animal presente en la muestra influían en los valores de cuantificación. Los sistemas específicos de PCR desarrollados también se aplicaron al análisis de piensos comerciales para mascotas, demostrando su capacidad para detectar pequeños porcentajes de las especies diana. Finalmente, se evaluó el potencial de marcadores epigenéticos basados en la metilación del ADN para la identificación y diferenciación de tejidos procedentes de ingredientes autorizados y prohibidos en los piensos. Se puede concluir que las técnicas genéticas desarrolladas en este trabajo proporcionan herramientas específicas y sensibles ara el control de autenticidad de piensos.